高品推介∣Hipro同源重组快速克隆试剂
产品简介
Hipro DNA同源重组克隆试剂盒（Cat# K001）可以高效、准确的组装DNA片段，从而实现简单快速的无缝克隆。该产品可以实现多个（1~5 ）带有重叠序列的片段一管式快速连接，整个过程只需在50℃下反应5-15 min即可完成。连接产物可进行多种化学感受态大肠杆菌的转化，阳性率达100%。
分别以英赞高保真PCR试剂2× PfuMax HiFi PCR ProMix（Cat# P217）扩增所得的：
DNA单片段（0.5kb）
3片段（0.1kb、0.5kb、1.5kb）
5片段（0.1kb、0.5kb、1.0kb、1.5kb、2.0kb）
作为同源重组的插入片段，用Hipro DNA Assembly Cloning Kit（Cat# K001）进行快速同源重组，转化到DH5α感受态细胞，培养12-16 h后，平板菌落生长状况如图所示，随机挑取30个单菌落进行PCR鉴定，阳性率高达100%。
产品特点
1
快速
5 ~15min即可完成连接反应。
2
兼容性强
可完成1~5片段的同源重组。
3
方便快捷
2×预混液包装，减少加样次数，使得
克隆更为高效。
4
连接准确
内含高保真DNA聚合酶和高保真DNA连
接酶可确保重组准确进行。
单片段同源重组
实验流程
01
• 载体线性化
通过双酶切、单酶切或反向PCR琼脂糖凝胶回收制得。
02
• 插入片段的制备
将线性化载体两端15 -20 bp序列作为同源序列，并将其分别添加到基因特异性正/反向扩增引物序列的5’端，以此对引物扩增得到带有同源序列的插入片段。
03
• 重组反应
将线性化载体和插入片段按比例混合，50℃反应5 min即可完成重组反应，实现两线性化DNA的体外组装环化。
04
• 转化感受态细胞
将反应完的重组产物直接进行转化，培养12-16 h，后进行阳性筛选。
产品信息
名称 | 规格 | 货号 |
Hipro DNA Assembly Cloning Kit | 25 rxn/50 rxn (10 μL/rxn) | K001A/B |