新品 | 快速高保真预混液

2025-07-08









EVNext®高保真 DNA聚合酶









成功率更高 , 速率更高 设置更简单 , 值得信赖的PCR酶


EVNext®高保真DNA 聚合酶是通过分子动力学模拟、AlphaFold2结构预测、结构域融合等理性设计手段筛选而得到的高性能PCR酶。


       EVNext®高保真DNA 聚合酶针对dUTP 结合口袋进行专有突变,克服了高保真酶不能兼容dUTP的重要限制,使其能够掺入 dUTP 并能扩增含尿嘧啶的DNA 模板。同时,该酶还保持着高保真DNA 聚合酶的所有优越特性:高准确性、高速度、强延伸能力、高特异性扩增复杂基因组模板以及高效率扩增含抑制剂的DNA模板。







产品优势


1

保真性高

约200×Taq保真度,各种GC含量的DNA片段均能保持较低的扩增错配率。


2

快速简便

延伸速率最快可达5 sec/kb,提供使用方便的预混液剂型,允许PCR产物直接凝胶上样。


3

成功率广

高效扩增高GC含量片段、包含抑制剂的DNA模板以及长达20kb的长片段基因,还可以直扩大肠杆菌菌液或全血。


4

耐受尿嘧啶

可掺入 dUTP 并扩增含尿嘧啶的DNA模板。


5

稳定性好

37℃存放一周或反复冻融20次后产品性能保持不变。




-   应用    -

  • 基因克隆、点突变

  • NGS文库扩增

  • 亚硫酸氢盐转化 DNA 的扩增

  • 残留污染控制

  • 基于尿嘧啶切除 (USER) 的克隆方法


产品形式









  EVNext®高保真DNA聚合酶的支持数据  









1

PCR产物序列的准确性测试








      作为具有校正功能的超高保真度的聚合酶,使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶产生的扩增子错误率非常低,让您对PCR产物序列准确性充满信心。


图1 不同品牌高保真酶相对于Taq DNA聚合酶的保真度

通过二代测序分子标签法确定错误率,随后均一化为相对于Taq DNA聚合酶的保真度倍数。



2

反应程序设置








      由于其反应体系的高特异性,使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶无需优化退火温度,当引物熔解温度Tm在50℃- 65℃范围内时,所有的靶标都可以使用60℃的通用退火温度来进行扩增。


图2 在两种退火温度条件下进行PCR扩增

从50ng人类基因组DNA(gDNA)中扩增10个不同Tm(如图上方标示)的靶标。采用60°C通用退火温度(左图)或使用Tm计算器计算的退火温度(右图)。


      不同长度的靶标均使用同一退火温度(60℃)和基于最长扩增子的延伸时间,即在同一模块中同时扩增多个靶标,不会影响PCR产量和特异性。


图3 EVNext®高保真DNA 聚合酶可同时扩增多个PCR靶标

从人类基因组DNA中扩增5个不同长度的靶标,对所有靶标采用基于最长扩增子的延伸时间(最长10.0kb ,需150秒)的通用循环方案(左图),或针对不同靶标采用不同的延伸时间方案(0.6kb 5秒,1.0 kb 15秒,2 kb 30秒,5.0 kb 75秒,10.0 kb 150秒)进行扩增(右图)。



3

PCR扩增的产量和特异性








      使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶可获得更高的PCR特异性和产量。 采用独特的反应Buffer体系,在配制PCR体系时有效抑制酶的活性,防止非特异性扩增和引物降解。


图4 使用EVNext®高保真DNA 聚合酶扩增产量高、特异性强

使用不同品牌的DNA聚合酶,按照厂家推荐方案从100 ng人类gDNA中扩增 0.5-5.0 kb DNA靶标。



4

靶标扩增的灵敏度








      较高的PCR扩增效率,可以在低至0.08 ng的人基因组DNA中实现靶标基因的扩增。


图5 EVNext®高保真DNA 聚合酶扩增灵敏度高

使用不同品牌的DNA聚合酶, 按照厂商推荐的方案从不同含量的人类基因组DNA中扩增1.0kb的靶标。



5

PCR抑制剂耐受力








      采用先进的融合蛋白改造技术和独特的PCR增强剂配方,EVNext®高保真DNA 聚合酶对来自植物(如木聚糖)、土壤(如腐殖酸)和血液(如血红素)的抑制剂表现出较强的耐受性。


图6 EVNext®高保真DNA 聚合酶的耐抑制剂性能强

使用不同的DNA聚合酶,按照厂商推荐方案从50 ng 人gDNA中扩增1.0kb靶标。反应组分中包含:1-无抑制剂;2-腐殖酸(0.5 μg/mL);3-血红素(2.5 μM);4-木聚糖(250 μg/mL)。



6

扩增高GC含量靶标








      反应buffer中配有 GC 增强剂,可更高效地扩增GC含量>65%的序列。


图7 使用EVNext®高保真DNA 聚合酶高效扩增高GC含量模板

使用不同的DNA聚合酶,按照厂商推荐方案从50 ng 人类gDNA中扩增4个高GC含量(如图上方所示)的1.0kb靶标。



7

长片段扩增能力








      持续合成能力强,可扩增长片段DNA—10kb的人类gDNA片段和15 kb的Lambda DNA片段。 延伸速度为15sec/kb, 扩增时间大大缩短。


图 8 EVNext®高保真DNA 聚合酶的长片段扩增能力

使用EVNext®高保真DNA 聚合酶成功扩增2个不同长度的长片段靶标:10 kb的人类基因组DNA靶标(左图)和15kb的Lambda DNA靶标(右图)。



8

耐受尿嘧啶能力








     以重亚硫酸盐处理后的人类基因组DNA为模板,使用EVNext®高保真DNA 聚合酶成功扩增多个不同长度靶标,扩增效率不受尿嘧啶影响。


图 9 EVNext®高保真DNA 聚合酶耐尿嘧啶扩增测试



9

保存稳定性








     配制好的PCR反应预混液在4℃存放2个月,或在37℃放置7天,或反复冻融20次,其扩增性能与-20℃存放的对照组相比无明显差别。


图10 EVNext®高保真DNA 聚合酶的稳定性测试

使用不同条件保存或处理的EVNext®高保真DNA 聚合酶,从50ng 人类基因组DNA中扩增0.5kb、1.0kb靶标。



试用申请!



试用规则|

每个课题组限申请2×EVNext®高保真PCR 预混液试用装1份,数量有限,送完即止,感谢您的理解与支持;


申请方式|

微信扫描上方二维码填写试用申请;

申请后请保持电话畅通,工作人员会跟您联系确认是否申请到试用装,并确认发货事宜;

必须提供试用报告。






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