作为具有校正功能的超高保真度的聚合酶,使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶产生的扩增子错误率非常低,让您对PCR产物序列准确性充满信心。
图1 不同品牌高保真酶相对于Taq DNA聚合酶的保真度
通过二代测序分子标签法确定错误率,随后均一化为相对于Taq DNA聚合酶的保真度倍数。
由于其反应体系的高特异性,使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶无需优化退火温度,当引物熔解温度Tm在50℃- 65℃范围内时,所有的靶标都可以使用60℃的通用退火温度来进行扩增。
图2 在两种退火温度条件下进行PCR扩增
从50ng人类基因组DNA(gDNA)中扩增10个不同Tm(如图上方标示)的靶标。采用60°C通用退火温度(左图)或使用Tm计算器计算的退火温度(右图)。
不同长度的靶标均使用同一退火温度(60℃)和基于最长扩增子的延伸时间,即在同一模块中同时扩增多个靶标,不会影响PCR产量和特异性。
图3 EVNext®高保真DNA 聚合酶可同时扩增多个PCR靶标
从人类基因组DNA中扩增5个不同长度的靶标,对所有靶标采用基于最长扩增子的延伸时间(最长10.0kb ,需150秒)的通用循环方案(左图),或针对不同靶标采用不同的延伸时间方案(0.6kb 5秒,1.0 kb 15秒,2 kb 30秒,5.0 kb 75秒,10.0 kb 150秒)进行扩增(右图)。
使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶可获得更高的PCR特异性和产量。 采用独特的反应Buffer体系,在配制PCR体系时有效抑制酶的活性,防止非特异性扩增和引物降解。
图4 使用EVNext®高保真DNA 聚合酶扩增产量高、特异性强
使用不同品牌的DNA聚合酶,按照厂家推荐方案从100 ng人类gDNA中扩增 0.5-5.0 kb DNA靶标。
较高的PCR扩增效率,可以在低至0.08 ng的人基因组DNA中实现靶标基因的扩增。
图5 EVNext®高保真DNA 聚合酶扩增灵敏度高
使用不同品牌的DNA聚合酶, 按照厂商推荐的方案从不同含量的人类基因组DNA中扩增1.0kb的靶标。
采用先进的融合蛋白改造技术和独特的PCR增强剂配方,EVNext®高保真DNA 聚合酶对来自植物(如木聚糖)、土壤(如腐殖酸)和血液(如血红素)的抑制剂表现出较强的耐受性。
图6 EVNext®高保真DNA 聚合酶的耐抑制剂性能强
使用不同的DNA聚合酶,按照厂商推荐方案从50 ng 人gDNA中扩增1.0kb靶标。反应组分中包含:1-无抑制剂;2-腐殖酸(0.5 μg/mL);3-血红素(2.5 μM);4-木聚糖(250 μg/mL)。
反应buffer中配有 GC 增强剂,可更高效地扩增GC含量>65%的序列。
图7 使用EVNext®高保真DNA 聚合酶高效扩增高GC含量模板
使用不同的DNA聚合酶,按照厂商推荐方案从50 ng 人类gDNA中扩增4个高GC含量(如图上方所示)的1.0kb靶标。
持续合成能力强,可扩增长片段DNA—10kb的人类gDNA片段和15 kb的Lambda DNA片段。 延伸速度为15sec/kb, 扩增时间大大缩短。
图 8 EVNext®高保真DNA 聚合酶的长片段扩增能力
使用EVNext®高保真DNA 聚合酶成功扩增2个不同长度的长片段靶标:10 kb的人类基因组DNA靶标(左图)和15kb的Lambda DNA靶标(右图)。
以重亚硫酸盐处理后的人类基因组DNA为模板,使用EVNext®高保真DNA 聚合酶成功扩增多个不同长度靶标,扩增效率不受尿嘧啶影响。
图 9 EVNext®高保真DNA 聚合酶耐尿嘧啶扩增测试
配制好的PCR反应预混液在4℃存放2个月,或在37℃放置7天,或反复冻融20次,其扩增性能与-20℃存放的对照组相比无明显差别。
图10 EVNext®高保真DNA 聚合酶的稳定性测试
使用不同条件保存或处理的EVNext®高保真DNA 聚合酶,从50ng 人类基因组DNA中扩增0.5kb、1.0kb靶标。